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組織學(xué)/組織培養(yǎng)術(shù)

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組織學(xué)

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前述幾種方法都是取人體或在體(in vivo)實驗動物的組織,經(jīng)固定等處理后,對已死亡的組織進行觀察研究的。組織培養(yǎng)(tissue culture)或稱體外實驗(in vitro)則是取活組織或活細胞在體外適宜的環(huán)境中培養(yǎng)成活,進行實驗研究。細胞在體外生存必須具有近似體內(nèi)的生存條件,如充足營養(yǎng)供應(yīng),合理的O2與CO2比例,必要的電解質(zhì)和適宜的滲透壓,pH值、溫度和濕度等,還需防止微生物污染。組織培養(yǎng)的特點在于可用研究各種理化因子(溫度、激素、藥物、毒物等)對活細胞的直接影響,并能觀察記錄(攝影、錄像)。組織培養(yǎng)與前述方法結(jié)合應(yīng)用,可研究某種因素對細胞增殖、分化代謝、運動、吞噬、分泌等影響和調(diào)節(jié)的動態(tài)過程,以及細胞病變、癌變和逆轉(zhuǎn)等機理,獲得在體實驗難達到的研究目的。

組織培養(yǎng)用液為平衡鹽水及血清(小牛血清、胎盤血清等),羊水腹水、組織浸出液等天然培養(yǎng)基(natural medium)。天然培養(yǎng)基成分復(fù)雜,且不穩(wěn)定。目前廣泛應(yīng)用人工合成培養(yǎng)基(synthetic medium)現(xiàn)有多種商品供應(yīng),使用方便,但常仍需補充部分血清等。若僅用合成培養(yǎng)基和已制備好的幾種必須因子與激素,稱此為無血清培養(yǎng)基(serum-free medium),其成分和含量均是已知的,可精細研究某種因子對細胞的生物效應(yīng)。

組織培養(yǎng)的方法甚多,常用容器有凹玻片培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、流動小室等。取組織塊貼于瓶底進行培養(yǎng),可觀察從組織塊生長遷移出的細胞。取胚胎某器官原基或器官的一部分進行培養(yǎng),稱器官培養(yǎng)(organ culture)。更精細的方法是分離和純化組織中的某種細胞,使之貼附在瓶底形成單層細胞(圖1-18),稱此為細胞培養(yǎng)(cell culture)。首次培養(yǎng)的細胞,稱原代培養(yǎng)(primary cultrue;細胞增殖而密集再傳代培養(yǎng),稱傳代培養(yǎng)(subculture)。經(jīng)長期培養(yǎng)而成的細胞群體,稱細胞系(cell line);用細胞克?。╟ell clone)或單細胞培養(yǎng)而建成的某種純細胞群體,稱細胞株(cell strain)。它們均可在液氮內(nèi)長期凍存,供隨時應(yīng)用?,F(xiàn)已建成多種腫瘤細胞株,廣泛用于實驗研究。

體外培養(yǎng)的上皮細胞在相差顯微鏡下的圖像


圖1-18 體外培養(yǎng)的上皮細胞在相差顯微鏡下的圖像(北京腫瘤研究所鄂征教授供圖)

32 電子顯微鏡術(shù) | 細胞融合術(shù) 32
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